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          超微量分光光度計有哪些用處?

          發布時間:2021-12-06瀏覽:1137次

          超微量分光光度計是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。無論在物理學、化學、生物學、 醫學、材料學、環境科學等科學研究領域 ,還是在化工、醫藥、環境檢測、冶金等現代生產與管理部門 ,都有廣泛而重要的應用。

          1、核酸的定量

          核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。
           

          2、蛋白質定量

          1)直接定量:這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。超微量分光光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的"背景"信息,設定此功能"開"。與測試核酸類似,要求A280的吸光值大于0.1A,最佳的線性范圍在1.0-1.5 之間。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。

          2)比色法蛋白質定量(顏色反應)

          蛋白質比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。

          比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。

          由于各種方法反應的基團以及顯色基團不一,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。所以在選擇比色法之前,最好是參照要測試的樣本的化學構成,尋找化學構成類似的標準蛋白作標準品。

          3、細菌細胞密度(OD600)
          實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據經驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度。通過檢測600nm處細胞生長培養的吸光度,從而監測微生物或其他細胞培養的生長率。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長的標準方法。實驗中偶爾會出現菌液的OD值出現負值,原因是采用了顯色的培養基,即細菌培養一段時間后,與培養基反應,發生變色反應。

           

           

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